Molekularbiologischer Nachweis der DNA von Legionella pneumophila in respiratorischen Materialien

Zweck der Untersuchung

Infektionen mit Legionella pneumophila können zu Pneumonien beim Menschen führen. Die vorliegende PCR dient dem Nachweis eines spezifischen DNA-Abschnittes von Legionella pneumophila in respiratorischen Materialien. Es werden mit dieser Methode sämtliche Serotypen von L. pneumophila erfasst.

Prinzip der Untersuchungsmethode

Mit Hilfe der real-time Polymerase Kettenreaktion wird das MIP-Gen von L. pneumophila amplifiziert und durch eine spezifische, fluoreszenzmarkierte Sonde detektiert. Durch die 5’-Nuclease-Aktivität der Taq-Polymerase wird im Reaktionsverlauf die Sonde zerstört, dabei wird der Energietransfer zwischen 5’-Reporter und 3’-Quencher-Fluorochrom aufgehoben. Die Detektion der Reporter-Fluoreszenz ist somit ein Maß, welches der amplifizierten DNA-Menge proportional ist. Die Fluoreszenz wird in Echtzeit (real-time) mittels entsprechender Filter im Chromo4 Cycler erfasst und aufgezeichnet.